• Объявления

    • djafarchik

      Сайт обновляется,вскоре работы будут завершены!   23.03.2017

      Сайт обновляется,Грибочек будет работать по новому,еще больше функционала и всяких плюшек для удобства пользователей! Без паники,процессы еще идут,возможна некоректная работа сайта ближайшие сутки -двое  
djafarchik

Клонирование Гриба Методом "биопсия" на жидкий мицелий

В теме 11 сообщений

этот пост описал в своей книге камрад с ентеогена (entheogen )с ником Belka

за что ему огромное спасибо ! способ действительно хорош!

итак клонирование "биопсия" -почувствуй себя настоящим грибоведоведом ))

дальше оригинальный текст автора

 

....Но вернемся к клонированию.))

Для клонирования плодового тела на жидкую среду вам понадобятся маленькие баночки с завинчивающимися крышками. Идеальный вариант это баночки от детского питания емкостью около 125мл или чуть больше. Естественно они должны быть оборудованы инъекционным портом, барьером из 2-х слоев тайвека и малюсенькой дырочкой для доступа воздуха заклеенной микропористым пластырем в пару слоев. Так же нам понадобится одноразовый шприц с иглой потолще (0.8 микрон нормуль.

1.jpg

Всю технику клонирования на жидкую среду я буду описывать сжато, упуская стандартные рекомендации о чистоте работы, о них можно прочесть в написанном ранее разделе.

1) Готовим жидкую среду. Кто какую хочет. Я использую 4% раствор акациевого меда. Те на 100мл фильтрованной воды я беру 4 грамма меда. Стерилизуем 15 минут, и не доставая из скороварки даем остыть.

2) Отобранное плодовое тело мы берем за ножку в области ближе к шляпке и раскачивая вырываем из субстратного блока.

3) Не толстую полоску ваты обильно смачиваем спиртом. Полоска должна быть достаточно длинна и широка что будет видно на картинках далее.

4) Захватываем нижнюю часть ножки плодового тела в полоску смоченной спиртом ваты вот так

2.jpg

3.jpg

5) Прокаливаем иглу в пламени горелки. АТТЕНШЕН!!! Не суем в пламя кончик иглы, прокаливаем место рядом с ним. Если совать сам кончик в пламя, операция может провалиться.

6) Охлаждаем иглу в рюмке со спиртом.

7) Проводим биопсию, для этого

-суем иглу в банку с жидкой средой, выбираем оттуда пару кубов жидкости-покаливаем охлаждаем иглу-протыкаем гриб через ватную полоску насквозь в одно движение. Очень важно втыкать иглу по прямой, не меняя ее угла относительно вектора прокола. Прокол нужно делать не перпендикулярно, а под углом к ножке как показано на фото-тут же вынимаем иглу назад, и пихаем в инокуляционный порт банки с жидкой средой-резко давим поршень возвращая жидкость из шприца в банку откуда ее брал

4.jpg

Собственно биопсия в чистом виде. Поэтому важно:

-следить чтоб перед взятием образца, что бы игла охладилась в спирте-за раз делать с одного плодового тела 6-7 баночек жидкой среды. В зависимости от прямоты ваших рук удачной будет успешная биопсия половины баночек-баночки обязательно нумеровать и подписывать

Все просто, проходя насквозь игла собирает в себя тонюсенький образец плодового тела. Именно поэтому нужно увеличить ее путь, вводя под углом к ножке гриба. Вот что должно получиться на выходе. Из маленького кусочка гриба во все стороны начинает рост мицелий.

Через 4 дня после биопсии

5.jpg

Через 5 дней после биопсии

6.jpg

Через 7 дней после биопсии

7.jpg

Фоткать дальше я не стал, тк на 10-й день облако мицелия заполнило банку почти целиком и ушло на хранение. Как можно видеть по фото рост мицелия очень ровный и однородный. На фото плохо видно, но если посмотреть на банку с увеличительным стеклом будет видно как из образца во всех направлениях тянуться сплетаясь между собой микронити мицелия.Те банки, в которых начался рост нужно осмотреть. Никаких помутнений лишних и прочей хрени быть не должно. Если хоть малейшее подозрение есть, отложите банку. Итак допустим из 6 банок у вас выжило 3 и в них разраслось облако мицелия. Теперь нужно провести тест. Для этого готовим зерно, и из каждой подписанной банки отдельным шприцом выбираем миц и им инокулируем одну, подписанную тем же номером что и банка с жидкой культурой, банку пшеницы. Если все три выжили и обросли зерно без заражения, поздравляю! У вас есть чистая от заражения материнская культура. Если что-то кикнуло на зерне, значит скорее всего ЖК из этой банки заражена. Либо на выкид сразу, либо если питаете надежды на повторный тест.

Итак, у вас есть клонированная культура, вы ее проверили и она оказалась чистой от заражений. Разумно ее сохранить и использовать эффективно. Поэтому использовать ее я советую пореже, держа в холодном месте. Сделайте себе большую баночку с рабочей культурой, перенеся в нее пару кубов с материнской баночки. И уже рабочую банку используйте для инокуляции зерна. )

5 пользователям понравился пост

Поделиться сообщением


Ссылка на сообщение
Поделиться на другие сайты

ан тан тан! сижу на банках, по минимуму кейсю, жду красивых грибасят, тоже хо4у по нему сделать биопсию и в монотую для леса грибов :suny:

отли4ная тема, Белка - 4увак интересный, сидел прям 4итал 4итал его drinks

Поделиться сообщением


Ссылка на сообщение
Поделиться на другие сайты

техника хороша -особенно  для грибов у которых мясистые ножки

пробывал на вешенке - тоже норм техника

Поделиться сообщением


Ссылка на сообщение
Поделиться на другие сайты

биопсию пилил, сделал по банкам, все закисло.

мне кажется в жидкость для био не стоит добавлять глюкозу. мож потому у меня все и встало.

Поделиться сообщением


Ссылка на сообщение
Поделиться на другие сайты

post-22098-0-20772700-1447190776_thumb.jpgpost-22098-0-88066400-1447190831_thumb.jpg

Вроде как получилось. Глюкоза. Паны.

2 пользователям понравился пост

Поделиться сообщением


Ссылка на сообщение
Поделиться на другие сайты

 

Вроде как получилось. Глюкоза. Паны.

   описание процесса - хотелось бы почитать ,можешь отдельной темой опубликовать

Поделиться сообщением


Ссылка на сообщение
Поделиться на другие сайты

Ой-ой-ой, извиняюсь, затупил, не на глюкозе, на фруктозе.

Поделиться сообщением


Ссылка на сообщение
Поделиться на другие сайты

Какой чудный способ!!! Какой(ая) молодец эт(а)от Belka!!! От себя добавлю, что неплохо иглы, предназначенные для внутривенных инъекций использовать. Особенно ветеринарные. У них диаметр 1,2 мм. 

Поделиться сообщением


Ссылка на сообщение
Поделиться на другие сайты

Что-то как-то слабо у меня выросла медузка. Максимум раза в три больше стала. Мну не понимать(

Поделиться сообщением


Ссылка на сообщение
Поделиться на другие сайты

Что-то как-то слабо у меня выросла медузка. Максимум раза в три больше стала. Мну не понимать(

   обсуждение  -неизменно скатуеться в флуд и засорение темы

Gideon

 запили свой репорт ,опиши условия как клонировал и в чем ростил жм,там и посмотрим "понимать -не понимать"

Поделиться сообщением


Ссылка на сообщение
Поделиться на другие сайты
Гость
Эта тема закрыта для публикации ответов.